Installationstipps und Säulenhandhabung
1. Spülen Sie das ganze System zuerst gründlich mit der mobilen Phase, um Luftblasen zu entfernen und zu verhindern, dass Luft in Ihre Säule kommt. Vergessen Sie nicht das Injektionssystem zu spülen.
2. Verwenden Sie die von PSS beigefügten Säulenverbinder, um Säulen in Reihe zu schalten. Vergewissern Sie sich, dass das Kapillarende maximal 1 mm aus dem Schneidring heraussteht
3. Beachten Sie die Flussrichtung. Der Betrieb entgegengesetzt zur Flussrichtung ist nur Teil desTroubleshootings oder nach einer langen Zeit der Lagerung bei Wiederinbetriebnahme erlaubt.
4. Drehen Sie die Verschlussschraube fest. Ziehen Sie sie jedoch nicht mehr als nötig an, da dies Ihre Säule und Ihren Säulenkopf beschädigen könnte.Kontrollieren Sie das Gewinde, wenn die Kapillare nicht dicht verschlossen werden kann.
5. Spülen Sie die Säule zunächst bei 1/5 der empfohlenenFlussrate mit der 10fachen Menge des Säulenvolumens.
Empfohlene Flussraten
| Fluss | I.D. 8 mm | I.D. 4.6 mm | I.D. 20 mm |
| Messung | 1 ml/min | 0.33 ml/min | 6.25 ml/min |
| Reduziert | 0.25 ml/min | 0.1 ml/min | 1.5 ml/min |
| Leerlauf | 0.1 ml/min | 0.03 ml/min | 0.6 ml/min |
6. Falls nach 2 - 3 Minuten noch kein Eluent aus dem Säulenende tritt, befolgen Sie bitte die Ratschlägeunter Wiederherstellung partiell trockener Säulen.
7. Ist der Lösungsmittelaustausch abgeschlossen, verbinden Sie Ihr System mit dem Detektor.
8. Erhöhen Sie langsam die Flussrate bis Sie bei dem gewünschten Wert angelangt sind.
9. Kontrollieren Sie den Säulendruck. Der Maximaldruck darf nie (auch nicht kurz-fristig) das Doppelte des im Säulenzertifikat angegeben Drucks überschreiten.
10. Geben Sie den Säulen genügend Zeit zu equilibrieren.
11. Überprüfen Sie anschließend die Bodenzahl des gesamten Chromatographiesystems inklusive Säulen (siehe PSS Säulen-Benutzerdokumentation). Ist das Ergebnis unbefriedigend, überprüfen Sie zunächst jede Säule einer Säulenkombination einzeln, danach kontaktieren Sie PSS oder Ihren PSS-Händler.
Tipp: Vorgehensweise bei Verwendung mehrerer Säulen:
• Installieren Sie die mittlere Porosität zuerst und die größte Porosität zum Schluss.
• Verwenden Sie nur von PSS empfohlene Säulenkombinationen.
• Kombinieren Sie niemals Linear-Säulen und Einzelporositäts-Säulen.
• Kombinieren Sie keine unterschiedlichen stationären Phasen und Partikelgrößen.
Wiederherstellung partiell trockener Säulen
Werden Säulen lange nicht verwendet oder sind diese bei der Lagerung höheren Temperaturen ausgesetzt, kann Lösungsmittel verdampfen. Tritt bei Inbetriebnahme kein Eluent aus dem Säulenende aus oder baut sich der erwartete Systemdruck nicht auf, kann dies ein Hinweis auf eine partiell trockene Säule sein.
Wiederbefeuchtung einer partiell trockenen Säule:
• Installieren Sie die Säule in entgegengesetzter Flussrichtung.
• Füllen Sie die Säule bei einem Fluss von 0.1 ml/min mit Lösungsmittel, bis am Säulenende keine Blasen mehr austreten.
• Installieren Sie die Säule in korrekter Flussrichtung und spülen Sie sie für 2 Stunden mit einem Fluss von 0.1 ml/min.
• Steigern Sie alle 5 Minuten die Flussrate um 0.2 ml/min bis Sie den gewünschten Wert erreicht haben
Reinigung
Verliert eine Säule an Effizienz (Rsp, Asymmetrie) oder vermuten Sie eine Verunreinigung des Gelmaterials, dann empfehlen wir folgende Vorgehensweise:
• Lösen Sie die Verbindungen zur Säule.
• Installieren Sie die Säule in entgegengesetzter Flussrichtung ohne Detektoren anzuschließen.
• Spülen Sie die Säule bei einer Flussrate von 0.1 ml/min mit einem Eluent, der die Verunreinigung löst und der mit Ihrem System vollständig kompatibel ist.
Tipp: Zur Reinigung wässriger Säulen empfiehlt sich eine Variation des pH-Wertes, der Pufferkonzentration oder der Zusatz kleiner Salzmengen bzw. die Beimischung von organischen Eluenten. Organische Säulen werden am besten durch Variation der Eluentenpolarität gereinigt. Hierzu können entweder geeignete Lösungsmittelmischungen (z.B. THF mit Toluol bzw. Chloroform) oder Lösungsmittelzusätze (TFAc in THF) verwendet werden